一、技术概述

RNA 提取与纯化是从生物样本中分离、纯化总 RNA 或特定类型 RNA（如 mRNA、miRNA）的关键技术，通过去除样本中的蛋白质、DNA、脂类、多糖等杂质，获得高纯度、高完整性的 RNA。高质量 RNA 是后续分子生物学实验（如 RT-qPCR、RNA 测序、Northern blot、 cDNA 文库构建）的基础，其纯度和完整性直接影响下游实验的准确性与重复性。

二、核心应用场景

基因表达分析：为 RT-qPCR、RNA-seq 提供高质量模板，用于检测基因转录水平差异。

非编码 RNA 研究：提取 miRNA、lncRNA 等小 RNA，用于其表达模式及功能机制研究。

病毒 RNA 检测：从血液、组织等样本中提取病毒 RNA（如流感病毒、新冠病毒），用于病原体鉴定与定量。

cDNA 合成与克隆：以纯化的 mRNA 为模板，合成 cDNA 用于基因克隆或全长 cDNA 文库构建。

蛋白翻译研究：通过提取的 RNA 分析其翻译效率，探究基因表达调控的翻译水平机制。

三、实验流程与周期

完整实验流程：样本接收与预处理→样本裂解（根据样本类型选择合适裂解液，如 TRIzol、RNAiso Plus）→匀浆处理（机械匀浆或超声破碎，针对组织样本）→相分离（加入氯仿离心，分离 RNA 所在的水相）→RNA 沉淀（异丙醇 / 乙醇沉淀）→RNA 洗涤（75% 乙醇去除盐离子）→RNA 溶解（无 RNase 水溶解）→质量检测（浓度、纯度、完整性分析）。

实验周期：

常规样本（细胞、新鲜组织）：3-5 个工作日

复杂样本（FFPE 组织、富含多糖 / 多酚的植物组织、血液样本）：5-7 个工作日

特定 RNA 类型（mRNA、miRNA）纯化：7-10 个工作日

四、客户需提供的样本信息

1. 样本类型：

细胞样本：贴壁细胞（≥5×10^5 个）、悬浮细胞（≥1×10^6 个）

组织样本：新鲜动物组织（≥30mg）、冷冻组织（-80℃保存，≥50mg）、石蜡包埋组织（FFPE，≥5 片，厚度 5-10μm）

体液样本：血液（EDTA 抗凝，≥1mL）、血清 / 血浆（≥500μL）、脑脊液（≥200μL）

植物样本：叶片、根、茎等（≥100mg，需去除杂质并快速冷冻）

2. 样本要求细则：

细胞样本：收集后用 PBS 洗涤 2 次，去除培养基残留，离心后弃上清，-80℃冻存（避免反复冻融）；运输时需干冰保存。

组织样本：新鲜组织需在取材后 30 分钟内放入 RNA 保存液（如 RNAlater）或直接 - 80℃冻存；FFPE 样本需提供病理编号及固定时间（固定时间≤48 小时，避免 RNA 过度降解）。

体液样本：血液样本需注明抗凝剂类型（EDTA 最佳，避免肝素，因其会抑制后续 PCR 反应）；运输时 4℃冷藏（≤24 小时）或干冰冷冻。

其他：需注明样本是否含有特殊成分（如高浓度脂类、多糖、蛋白酶），以便提前准备专用提取试剂。

五、交付内容及增值服务

1. 基础交付：

完整实验报告（含样本处理方法、试剂品牌、提取步骤及质量检测结果）

纯化的 RNA 样本（溶于无 RNase 水，体积≥20μL，浓度≥50ng/μL）

质量检测数据：Nanodrop 检测报告（OD260/280、OD260/230 值，评估纯度）、Agilent Bioanalyzer 检测报告（RNA 完整性 RIN 值，评估完整性，仅针对需严格质控的样本）

剩余样本：若客户需要，可 - 80℃保存 1 个月（需提前说明）

2. 增值分析：

RNA 完整性分级：根据 RIN 值（1-10）对 RNA 质量分级，提供下游实验适用性建议（如 RIN≥8.0 适合 RNA-seq，RIN≥7.0 适合 RT-qPCR）。

微量 RNA 富集：针对低丰度样本（如穿刺组织、单细胞），提供 RNA 扩增服务（线性扩增，避免偏倚），满足下游实验需求。

基因组 DNA 去除验证：通过 PCR 检测（以 RNA 为模板直接扩增，无条带证明无 gDNA 污染），确保 RNA 纯度。

六、技术优势

全程无 RNase 污染：实验环境采用 RNase 抑制剂定期消毒，使用无 RNase 耗材及试剂，从样本处理到 RNA 保存全程避免 RNA 酶污染，降低降解风险。

针对复杂样本优化方案：对富含多糖的植物组织采用 CTAB 法预处理，对 FFPE 样本使用专用脱蜡试剂及高温修复缓冲液，对血液样本采用红细胞裂解 - 白细胞富集法，确保各类样本的 RNA 提取效率。

严格质量质控体系：每批 RNA 样本均通过 “浓度 - 纯度 - 完整性” 三重检测，确保 OD260/280 在 1.8-2.1（纯 RNA 标准），OD260/230≥1.8（无盐离子 / 有机物污染），RIN 值符合下游实验要求。

设备先进：采用自动化核酸提取仪（如 Qiagen QIAcube）处理批量样本，减少人工操作误差；搭配 Agilent 2100 Bioanalyzer 精确检测 RNA 完整性，结果可追溯。

七、常见问题（FAQ）

Q：RNA 提取后 OD260/280 值偏低（＜1.8）是什么原因？

A：可能因样本中蛋白质未完全去除（如组织匀浆不充分）或洗涤步骤不足导致。我方会通过增加氯仿抽提次数或延长洗涤时间优化，若仍不达标，将免费重新提取。

Q：FFPE 样本 RNA 降解严重，还能用于 RT-qPCR 吗？

A：FFPE 样本 RNA 通常片段化（多为 100-500bp），但短片段 RNA 可用于扩增短目标序列（＜150bp）的 RT-qPCR。我方会评估 RNA 片段分布，推荐合适的引物设计策略（如扩增靠近 3' 端的短片段）。

Q：提取的 RNA 如何保存？

A：短期保存（1 周内）可 - 20℃冷藏，长期保存需 - 80℃冷冻（避免反复冻融）；若需长期运输，需用干冰包装（确保全程低温，避免 RNA 降解）。